細胞經誘導或抑制后,需對自噬過程進行觀察和檢測,常用的策略和技術有:
1、電鏡下觀察自噬體的形成
2、在熒光顯微鏡下采用GFP-LC3融合蛋白來示蹤自噬發生
3、利用Western Blot檢測LC3-II/I比值大小可估計自噬水平的高低。
4、檢測長壽蛋白的批量降解(非特異)
5、MDC染色:包" />

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細胞自噬檢測

醫學實驗主要包括分子生物學、細胞生物學、病理學、免疫學的實驗;SCI論文主要包括論文翻譯、母語潤色改寫;專利主要包括發明專利、實用新型專利、外觀設計專利的申請;專著主要包括單篇學術論文、系列學術論文和學術專著的出版。

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細胞自噬主要有三種形式:微自噬(microautophagy)、巨自噬(macroautophagy)和分子伴侶介導的自噬 (Chaperone-mediated autophagy,CMA)。
細胞經誘導或抑制后,需對自噬過程進行觀察和檢測,常用的策略和技術有:
1、電鏡下觀察自噬體的形成
2、在熒光顯微鏡下采用GFP-LC3融合蛋白來示蹤自噬發生
3、利用Western Blot檢測LC3-II/I比值大小可估計自噬水平的高低。
4、檢測長壽蛋白的批量降解(非特異)
5、MDC染色:包

細胞自噬檢測

細胞自噬主要有三種形式:微自噬(microautophagy)、巨自噬(macroautophagy)和分子伴侶介導的自噬 (Chaperone-mediated autophagy,CMA)。
細胞經誘導或抑制后,需對自噬過程進行觀察和檢測,常用的策略和技術有:
1、電鏡下觀察自噬體的形成
2、在熒光顯微鏡下采用GFP-LC3融合蛋白來示蹤自噬發生
3、利用Western Blot檢測LC3-II/I比值大小可估計自噬水平的高低。
4、檢測長壽蛋白的批量降解(非特異)
5、MDC染色:包括自噬體,所有酸性液泡都被染色,故屬于非特異性的。
6、CellTrackerTM Green染色:主要用于雙染色,但其能染所有的液泡,故也屬于非特異性的。
在研究自噬相關蛋白時,需對其進行定位。由于自噬體與溶酶體、線粒體、內質網、高爾基體關系密切,為了區別,常用到一些示蹤蛋白在熒光顯微鏡下來共定位:
Lamp-2:溶酶體膜蛋白,可用于監測自噬體與溶酶體融合。
LysoTrackerTM 探針:有紅或藍色可選,顯示所有酸性液泡。
pDsRed2-mito:載體,轉染后表達一個融合蛋白(紅色熒光蛋白+線粒體基質定位信號),可用來檢測線粒體被自噬掉的程度(Mitophagy)。
MitoTraker探針:特異性顯示活的線粒體,熒光在經過固定后還能保留。
Hsp60:定位與線粒體基質,細胞死亡時不會被釋放。
Calreticulin(鈣網織蛋白):內質網腔

 
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