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將動物機體的各種組織從機體中取出，經各種酶（常用胰蛋白酶）、螯合劑（常用EDTA）或機械方法處理，分散成單細胞，置合適的培養基中培養，使細胞得以生存、生長和繁殖，這一過程稱原代培養。細胞培養是生物學和醫學研究最常用的手段之一，可分為原代培養和傳代培養兩種。

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1、原代培養的操作步驟為：取材→分離→培養。
（1）取材：對于不同的組織有不同的取材方法，但均應保持材料的新鮮及嚴格無菌。

皮膚和粘膜：主要取自于手術過程中的皮片，方法似外科取斷層皮片手術操作，但面積一般2~4平方厘米。
內臟和實體瘤：內臟除消化道外基本是無菌的，但取材時要明確和熟悉所需組織的類型和部位，實體瘤取材時要取腫瘤細胞豐富的區域，要避開破潰、壞死液化部分，以防污染，盡量去除混雜的結締組織。
血液細胞：血細胞、淋巴細胞的取材，一般多抽取靜脈外周血，或從淋巴組織中（如脾、扁桃體、胸腺、淋巴結等）分離細胞，取材時應注意抗凝。
骨髓、羊水、胸/腹水細胞取材：嚴格無菌，注意抗凝，還要盡快分離培養，離心后，用無鈣、鎂PBS洗兩次，再用培養液洗一次后即可培養，不宜低溫存放。
鼠胚組織取材：首先用引頸或氣管窒息致死法處死孕期合適的動物，然后將其整個浸泡在含有75%酒精的燒杯中，5分鐘后（注意時間不能太長，以避免酒精從口或其他通道進入體內，影響組織活力），取出動物，在消毒過的木板上可用無菌的圖釘或大頭針固定四肢，切開皮膚，用無菌操作法解剖取胚或用無菌止血鉗挾起皮膚、用無菌眼科剪沿軀干中部環形剪開皮膚，用止血鉗分別挾住兩側皮膚拉向頭尾，把動物反包，暴露軀干，然后再固定，更換無菌解剖器材，采用無菌操作法解剖取出胚胎。
幼鼠胚腎（或肺）取材：幼鼠采用上述方法處死消毒后，腹部朝上固定在木板上，先切開游離毛皮并拉開至兩側：然后采用無菌法打開胸腔取肺，或背部朝上固定在木板上，先將背部毛皮切開游離并拉向兩側，然后采用無菌法從背部打開腹腔取腎。
雞（鴨）鳥類胚胎組織取材步驟：

將胚蛋置于蛋架上，先用溫水清洗蛋殼，再用75%酒精棉球擦干；
經碘酒、75%酒精消毒后，在無菌條件下采用無菌法用剪刀或鑷子打開氣室，沿氣室邊緣去除蛋殼；
用眼科鑷撕去殼膜，暴露出雞胚；
用彎頭鑷輕挑起胚頭，取出胚胎，放入無菌平皿中，解剖取材。

（2）分離：不同的組織類型采用不同的分離方法。

軟組織：軟組織分離法包括銳性分離法和鈍性分離法。銳性分離法使用銳利的手術器械如刀、剪等切開組織，適用于皮膚、黏膜、漿膜、結締組織、筋膜、肌肉、腱、血管、神經以及內臟器官的分離。
硬組織：對骨質、軟骨角質和蹄壁的分離，則屬于硬組織分離法。
食用菌菌種：食用菌菌種的分離方法包括組織分離法、孢子分離法和基內菌絲分離法。組織分離法是在無菌操作條件下，利用子實體內部組織（菌肉、菌柄）、菌核或菌索來分離獲得純菌種的方法。
NK細胞：NK細胞可以從外周血、臍帶血、組織（如淋巴組織、脾臟、骨髓等）和誘導多能干細胞(iPSC)中分離。不同的來源有不同的分離方法，例如外周血來源的NK細胞可以通過密度梯度離心法或免疫磁珠分選法分離。

（3）培養：原代細胞的培養方法分為組織塊培養法、消化培養法、懸浮細胞培養法和器官培養。前兩種是最簡單、常用、成功率高的方法。根據不同分離方法取得的細胞接種到培養瓶后，放置于37℃ CO2培養箱中培養。

2、原代細胞培養應用及優缺點

（1）應用領域：

藥理學和藥效學研究：原代細胞培養可用于評估藥物對特定細胞類型的作用和效果，更接近體內情況，有助于篩選和優化藥物。
癌癥研究：原代腫瘤細胞培養可以提供更準確的癌癥模型，用于研究腫瘤的生長、轉移和治療反應。
組織工程研究：原代細胞可用于構建組織工程支架或模擬器官的種子細胞，用于再生醫學和器官修復研究。

（2）優點：

保留了原代細胞的體內特性和功能，更能反映生物體內的生理狀態。
提供更接近生理環境的模型，用于研究藥物的作用機制、毒性和副作用等。
可以從個體中獲取，并為個體化醫療和定制治療提供支持。

（3）缺點：

原代細胞生長有限，容易失去其特性和功能。
培養過程較為復雜，需要特定的培養條件和技術知識。
樣本獲取受限，且存在批次差異，不同個體之間可能存在差異。

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